Primers | Ambrosia Symbiosis

Diluting primers

Reconstituting lyophilized primers to create 100X stock:
Resuspend to 100 uM/L concentration: for 28.5 nM of lyophilized primer, add 285 ul water (10 times more, in uL).

Dilute to make working solution :
To 10uL of the working stock above, add 90 uL of water, to make 10 uM/L (or 10 pM/ul) solution.

Working concentration: Use 1uL of the working solution above in 25uL reaction (10/25=0.4pM per rxn).

Primers we use

gene	primer code	seq
16S	1492R	GGTTACCTTGTTACGACTT
16S	27F	5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
16S bact rev	338R	5′-TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	Amann et al. 1995. Microbiol. Rev. 59, 143–169.
16S bact+archaea for	515F	5′-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA	Bergmann et al 2011 (Fierer lab)
16S bact+archaea rev	806R	5-GGACTACVSGGGTATCTAAT	Bergmann et al 2011 (Fierer lab)
cellobiohydrolase	fungCBH1f
cellobiohydrolase	fungCBH1r
efTu	52F	Ludwig et al
ITS (end of SSU)	ITS1	TCCGTAGGTGAACCTGCGG
ITS (in 5.8S, for)	ITS3	GCATCGATGAAGAACGCAGC
ITS (in 5.8S, rev)	ITS2	GCTGCGTTCTTCATCGATGC
ITS (rev, start of LSU)	ITS4	TCCTCCGCTTATTGATATGC
ITS fungal (like ITS1, basidio)	ITS1-F	CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA
SSU (18S) general	NS1	GTAGTCATATGCTTGTCTC	eukaryotes?
SSU rev	NS2	GGCTGCTGGCACCAGACTTGC	550 in S. cerevisiae; eukaryotes?
SSU (18S) general	NS4	CTTCCGTCAATTCCTTTAAG	eukaryotes?
SSU fungal	AU2	5′-TTTCGATGGTAGGATAGDGG	Vandenkoornhuyse et al. 2002, Science 295:2051
SSU fungal	AU4	5′-RTCTCACTAAGCCATTC	Vandenkoornhuyse et al. 2002, Science 295:2051
SSU fungal	JH-SSU-304	5′-CCCTATCAACTTTCGATG	upstream of AU2, 2bp difference from Curculionidae, can use with NS2 for 240bp conserved product or with JH-SSU-822 for ~500bp of variable product
SSU fungal (rev)	JH-SSU-822	5′-CTAGAAACCAACAAAATAG	2bp upstream of SR4, 4bp difference from Curculionidae
SSU fungal (rev)	JH-SSU-1646	5′-CTAAGCCATTCAATCGGTA	6bp upstream of AU4, 2bp difference from Curculionidae
LSU (28S)	LR0R	5′-ACCCGCTGAACTTAAGC	identical in insect and fungi
LSU (28S) rev	LR2	5′-TTTTCAAAGTTCTTTTC	White et al., from yeast, 1bp difference from filamentous ascos
LSU (28S) rev	LR3	5′-CCGTGTTTCAAGACGGG	identical for beetles and fungi
LSU (28S)	JH-LSU-91	5′-AGTAACGGCGAGTGAAG	probably universal for fungi, not for insect, position 91 in S. cerevisiae 28S
LSU (28S) rev	JH-LSU-377	5′-TTTTCAAAGTGCTTTTC	almost identical to LR2 but with one bp more specific to filamentous ascos, position 377 in S. cerevisiae; doesn’t work very well
LSU (28S) rev	JH-LSU-638	5′-GGTCCGTGTTTCAAGAC	reverse complement to Vilgalis’s LR3R (which is not the same as reverse complement of LR3)
LSU (28S) rev	JH-LSU-643	5′-CTCCTTGGTCCGTGTTTC	tested with Raffaelea spp., inconsistent product
LSU (28S) rev	JH-LSU-830	5′-GTTTCCTCTGGCTTCACCC	tested with Raffaelea spp., inconsistent product

R= A G (purine) D= G A T

Buying primers

ITS1 example CType: DNA Oligos – modified & non-modified
Oligo Name: …
Synthesis Scale: 0.025 µmol
Purification: Desalt
Sequence (5′ to 3′): …
Format: Lab-ready
Number of Tubes per Oligo: 1
Concentration (µM): NA

454 primers – NO LONGER IN USE

From IDT: to get reaction-ready concentration, get 1nm in 100uL (concentration: 10)
Old FLX chemistry Fungi.

454 primer	Bar Code	linker	template primer	primer name	concatenated	ordered
GCCTTGCCAGCCCGCTCAG	none	TC	AGTAACGGCGAGTGAAG	JH-LSU-091-454B	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGTCAGTAACGGCGAGTGAAG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	AACTCGTCGATG	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-201	GCCTCCCTCGCGCCATCAGAACTCGTCGATGAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	AACTGTGCGTAC	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-202	GCCTCCCTCGCGCCATCAGAACTGTGCGTACAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	AAGAGATGTCGA	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-203	GCCTCCCTCGCGCCATCAGAAGAGATGTCGAAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	AAGCTGCAGTCG	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-204	GCCTCCCTCGCGCCATCAGAAGCTGCAGTCGAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	AATCAGTCTCGT	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-205	GCCTCCCTCGCGCCATCAGAATCAGTCTCGTAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	AATCGTGACTCG	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-206	GCCTCCCTCGCGCCATCAGAATCGTGACTCGAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACACACTATGGC	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-207	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACACACTATGGCAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACACATGTCTAC	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-208	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACACATGTCTACAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACACGAGCCACA	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-209	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACACGAGCCACAAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACACGGTGTCTA	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-210	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACACGGTGTCTAAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACACTAGATCCG	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-211	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACACTAGATCCGAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACACTGTTCATG	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-212	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACACTGTTCATGAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACAGACCACTCA	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-213	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACAGACCACTCAAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACAGAGTCGGCT	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-214	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACAGAGTCGGCTAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACAGCAGTGGTC	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-215	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACAGCAGTGGTCAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACAGCTAGCTTG	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-216	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACAGCTAGCTTGAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACAGTGCTTCAT	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-217	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACAGTGCTTCATAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACAGTTGCGCGA	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-218	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACAGTTGCGCGAAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACATCACTTAGC	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-219	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACATCACTTAGCAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACATGATCGTTC	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-220	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACATGATCGTTCAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACATGTCACGTG	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-221	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACATGTCACGTGAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACATTCAGCGCA	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-222	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACATTCAGCGCAAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACCACATACATC	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-223	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACCACATACATCAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACCAGACGATGC	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-224	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACCAGACGATGCAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACCAGCGACTAG	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-225	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACCAGCGACTAGAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACCGCAGAGTCA	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-226	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACCGCAGAGTCAAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACCTCGATCAGA	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-227	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACCTCGATCAGAAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011
GCCTCCCTCGCGCCATCAG	ACCTGTCTCTCT	AG	CCGTGTTTCAAGACGGG	LR3-454A-228	GCCTCCCTCGCGCCATCAGACCTGTCTCTCTAGCCGTGTTTCAAGACGGG	20-Aug-2011

Old FLX chemistry bacteria and archaea.

454 primer	Bar Code	linker	template primer	primer name
FLA B primer: GCCTTGCCAGCCCGCTCAG	none	GA	GTGCCAGCMGCCGCGGTAA	806R-454B-2012Feb
FLX A primer: GCCTCCCTCGCGCCATCAG	various	CC	GGACTACVSGGGTATCTAAT	515f-454A-2012Feb-well_position

Barcodes on 515R primer ordered on Feb 06 2012 (order “515F-806R-454barcoded”). R primer mixed with each barcoded F primer.

A1 GTAGTGTCTAGC
A2 GTCGCTGTCTTC
A3 GTGAGGTCGCTA
A4 GTTGACGACAGC
A5 GTCACGACTATT
A6 GTCTGACAGTTG
A7 GTGTGCTATCAG
A8 TACAGATGGCTC
A9 TACTTACTGCAG
A10 GGATCGCAGATC
A11 GTAGACTGCGTG
A12 GTCAACGCGATG
B1 GTCTCTCTACGC
B2 GTGTCTACATTG
B3 GTATGTTGCTCA
B4 GTCTCATGTAGG
B5 GTGTACCTATCA
B6 TAGCTGAGTCCA
B7 GGCGACATGTAC
B8 GTAGATGCTTCG
B9 GGTGCGTGTATG
B10 GCTTACATCGAG
B11 GTATCCATGCGA
B12 TAACTCTGATGC
C1 TACTAATCTGCG
C2 TAGCCTCTCTGC
C3 GCTTGCGAGACA
C4 GTCATATCGTAC
C5 GTACGGCATACG
C6 GTATGCGCTGTA
C7 GTCTATCGGAGT
C8 GTGGCGATACAC
C9 TACACGATCTAC
C10 TACTGGACGCGA
C11 TAGCTCGTAACT
C12 GGCAGTGTATCG
D1 GTAGAGCTGTTC
D2 GCTTCATAGTGT
D3 TAACAGTCGCTG
D4 TACGTGTACGTG
D5 TAGCATCGTGGT
D6 GTACAAGAGTGA
D7 TACGCGCTGAGA
D8 TAGATCCTCGAT
D9 GCTGTGTAGGAC
D10 GGTCGTAGCGTA
D11 GTCTGGATAGCG
D12 GTGTGTGTCAGG
E1 TACAGTCTCATG
E2 TACTTCGCTCGC
E3 TAGGTATCTCAC
E4 GTCGTAGCCAGA
E5 GCTGTAGTATGC
E6 GGTCACTGACAG
E7 GTGATAGTGCCG
E8 GTATATCCGCAG
E9 GTCATTCACGAG
E10 GTCTTCGTCGCT
E11 GTGTTGCAGCAT
E12 TACATCACCACA
F1 TAGACTGTACTC
F2 GTAGCGCGAGTT
F3 GTCCATAGCTAG
F4 TAGTCGTCTAGT
F5 GGCTATGACATC
F6 GTGACCTGATGT
F7 TAGTGCTGCGTA
F8 GGTATACGCAGC
F9 GTAGCTGACGCA
F10 GTCGACTCCTCT
F11 GTGACTGCGGAT
F12 GTTCGCGTATAG
G1 TACGATGACCAC
G2 TAGATAGCAGGA
G3 TAGTGTGCTTCA
G4 GTTAGAGCACTC
G5 TACCGCTAGTAG
G6 TAGAGAGAGTGG
G7 TAAGCGCAGCAC
G8 TACTACATGGTC
G9 TAGCGACATCTG
G10 GGACGTCACAGT
G11 GTACTCTAGACT
G12 TACACACATGGC
H1 TACTGCGACAGT
H2 TAGCGGATCACG
H3 GTATGACTGGCT
H4 GTCTACACACAT
H5 GTGCACATTATC
H6 GGCGTACTGATG
H7 GTAGCAACGTCT
H8 TAGCACACCTAT
H9 TACGGTATGTCT
H10 GTTGTATACTCG
H11 GTCGTGTGTCAA
H12 GTGCAATCGACG

The complete order, including the barcodes above:

well	oligo1	oligo2_to_the_same_well
A1	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTAGTGTCTAGCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
A2	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCGCTGTCTTCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
A3	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGAGGTCGCTACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
A4	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTTGACGACAGCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
A5	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCACGACTATTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
A6	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCTGACAGTTGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
A7	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGTGCTATCAGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
A8	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACAGATGGCTCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
A9	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACTTACTGCAGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
A10	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGGATCGCAGATCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
A11	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTAGACTGCGTGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
A12	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCAACGCGATGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B1	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCTCTCTACGCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B2	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGTCTACATTGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B3	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTATGTTGCTCACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B4	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCTCATGTAGGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B5	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGTACCTATCACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B6	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGCTGAGTCCACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B7	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGGCGACATGTACCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B8	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTAGATGCTTCGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B9	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGGTGCGTGTATGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B10	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGCTTACATCGAGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B11	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTATCCATGCGACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
B12	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAACTCTGATGCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C1	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACTAATCTGCGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C2	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGCCTCTCTGCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C3	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGCTTGCGAGACACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C4	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCATATCGTACCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C5	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTACGGCATACGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C6	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTATGCGCTGTACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C7	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCTATCGGAGTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C8	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGGCGATACACCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C9	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACACGATCTACCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C10	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACTGGACGCGACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C11	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGCTCGTAACTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
C12	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGGCAGTGTATCGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D1	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTAGAGCTGTTCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D2	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGCTTCATAGTGTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D3	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAACAGTCGCTGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D4	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACGTGTACGTGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D5	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGCATCGTGGTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D6	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTACAAGAGTGACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D7	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACGCGCTGAGACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D8	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGATCCTCGATCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D9	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGCTGTGTAGGACCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D10	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGGTCGTAGCGTACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D11	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCTGGATAGCGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
D12	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGTGTGTCAGGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E1	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACAGTCTCATGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E2	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACTTCGCTCGCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E3	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGGTATCTCACCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E4	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCGTAGCCAGACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E5	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGCTGTAGTATGCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E6	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGGTCACTGACAGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E7	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGATAGTGCCGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E8	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTATATCCGCAGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E9	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCATTCACGAGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E10	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCTTCGTCGCTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E11	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGTTGCAGCATCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
E12	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACATCACCACACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F1	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGACTGTACTCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F2	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTAGCGCGAGTTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F3	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCCATAGCTAGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F4	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGTCGTCTAGTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F5	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGGCTATGACATCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F6	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGACCTGATGTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F7	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGTGCTGCGTACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F8	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGGTATACGCAGCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F9	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTAGCTGACGCACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F10	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCGACTCCTCTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F11	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGACTGCGGATCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
F12	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTTCGCGTATAGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G1	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACGATGACCACCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G2	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGATAGCAGGACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G3	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGTGTGCTTCACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G4	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTTAGAGCACTCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G5	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACCGCTAGTAGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G6	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGAGAGAGTGGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G7	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAAGCGCAGCACCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G8	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACTACATGGTCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G9	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGCGACATCTGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G10	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGGACGTCACAGTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G11	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTACTCTAGACTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
G12	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACACACATGGCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H1	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACTGCGACAGTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H2	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGCGGATCACGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H3	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTATGACTGGCTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H4	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCTACACACATCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H5	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGCACATTATCCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H6	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGGCGTACTGATGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H7	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTAGCAACGTCTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H8	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTAGCACACCTATCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H9	GCCTCCCTCGCGCCATCAGTACGGTATGTCTCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H10	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTTGTATACTCGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H11	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTCGTGTGTCAACCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
H12	GCCTCCCTCGCGCCATCAGGTGCAATCGACGCCGGACTACVSGGGTATCTAAT	GCCTTGCCAGCCCGCTCAGGAGTGCCAGCMGCCGCGGTAA

Titanium Lib-a chemistry, NOT YET USED, need to confirm correctness. Fungal LSU primers. Four-bp multiplex identifiers (MIDs). Only one-directional sequencing needed, from the more variable 3′ end, so only B adapters have multiple MIDs attached.

adaptor	adaptor seq	key	MID name	mid	our primer 5-3′	direction	name
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL091	CGTACAGATAT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-091
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL092	CGTAGCTCTCT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-092
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL093	CGTATAGTGCT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-093
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL094	CGTCAGCGACT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-094
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL095	CGTCGCAGTGT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-095
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL096	CGTCTCACGAT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-096
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL097	CGTGACTCAGT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-097
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL098	CTACACGCTCT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-098
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL099	CTACGATATGT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-099
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL100	CTAGACAGACT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-100
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL101	CTAGTACTCAT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-101
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL102	CTATATGTCGT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-102
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL103	CTATCGACACT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-103
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL104	CTATGTAGAGT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-104
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL105	CTCACGTACAT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-105
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL106	CTCGAGTCTCT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-106
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL107	CTCGTCGAGAT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-107
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL108	CTCTACAGCGT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-108
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL109	CTGTCGTGCGT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-109
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL110	CTGTGACGTGT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-110
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL111	GACGCTGTCGT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-111
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL112	GACGTATGACT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-112
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL113	GACTAGCTAGT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-113
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL114	GAGACGTCGCT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-114
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL115	GAGAGAGACGT	CCGTGTTTCAAGACGGG	rev	LR3-454B-115
A	CGTATCGCCTCCCTCGCGCCA	TCAG	no mid	no mid	AGTAACGGCGAGTGAAG	for	JH-LSU-091-454A
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL091	CGTACAGATAT	GTAGTCATATGCTTGTCTC	rev	NS1-454B-RL091
A	CGTATCGCCTCCCTCGCGCCA	TCAG	no mid	no mid	GGCTGCTGGCACCAGACTTGC	for	NS2-454A

Again – Titanium Lib-A chemistry, not yet tested, Bacterial primers.

adaptor	adaptor seq	key	MID name	mid	our primer 5-3′	direction	name
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL001	AGTCGTGGTGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-001
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL002	ATACTAGGTGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-002
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL003	ACGAGTGGTGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-003
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL004	ATACGTGGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-004
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL005	AGTCTACGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-005
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL006	ACTAGAGGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-006
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL007	AGTGTGTGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-007
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL008	ACACAGTGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-008
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL009	ACGATCTGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-009
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL010	AGAGACGGAGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-010
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL011	ACTCGTAGAGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-011
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL012	ACGACGGGAGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-012
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL013	ACGTCGGGTCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-013
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL014	ACTCTCGGACT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-014
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL015	ATAGTAGGACT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-015
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL016	AGACGTCGACT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-016
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL017	AGTGTAGGACT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-017
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL018	ACTACTAGACT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-018
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL019	ACGTATAGTAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-019
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL020	AGTACGTGCTG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-020
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL021	ACGCGTGGTCG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-021
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL022	AGTACTGGTCG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-022
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL023	ACGTAGTGTCG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-023
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL024	ATCGACGGACG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-024
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL025	ACTACGGGTAG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-025
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL026	ACGTACGGTAC	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-026
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL027	ATACGTAGGAC	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-027
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL028	ACGTCGTGCAC	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-028
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL029	ACTCACGGTGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-029
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL030	AGTATGGGTGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-030
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL031	ACGCTGTGTGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-031
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL032	ATATAGTGTGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-032
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL033	AGAGTCTGTGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-033
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL034	ACACGAGGTGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-034
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL035	ATCGACAGTGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-035
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL036	AGCGCGCGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-036
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL037	ACACTCAGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-037
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL038	ATCTCTGGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-038
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL039	AGAGAGGGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-039
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL040	ATCAGCGGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-040
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL041	ATGCTAGGCGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-041
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL042	ATATCACGAGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-042
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL043	ACAGTGGGAGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-043
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL044	AGCTAGGGAGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-044
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL045	ATATATGGAGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-045
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL046	ACGAGATGAGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-046
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL047	AGTACAGGAGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-047
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL048	AGCGCTAGAGT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-048
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL049	AGTGAGGGTCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-049
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL050	ACTATAGGTCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-050
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL051	AGATCAGGTCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-051
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL052	ATCTGTAGTCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-052
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL053	AGAGATAGTCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-053
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL054	ACAGCGTGTCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-054
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL055	AGACTAGGTCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-055
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL056	ACTACGCGGCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-056
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL057	ACTCGTGGGCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-057
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL058	ACGCACAGGCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-058
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL059	AGTATCTGGCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-059
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL060	AGTCGACGGCT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-060
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL061	ACGTGCAGACT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-061
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL062	ATAGCGGGACT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-062
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL063	ACAGACGGACT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-063
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL064	ATCGTGGGTAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-064
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL065	AGCACGGGTAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-065
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL066	AGTGCTGGTAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-066
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL067	ACTAGCTGTAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-067
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL068	ATACTCTGTAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-068
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL069	ACGTGAGGGAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-069
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL070	AGACTGAGGAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-070
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL071	ATACGAGGGAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-071
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL072	ACGTCTCGGAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-072
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL073	AGACGTGGCAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-073
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL074	AGTAGTCGCAT	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-074
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL075	ACTGTCTGGTG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-075
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL076	AGACTCGGGTG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-076
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL077	ATCGTAGGGTG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-077
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL078	ATATACAGGTG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-078
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL079	ACATCGTGGTG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-079
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL080	AGAGTATGGTG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-080
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL081	ACAGTAGGCTG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-081
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL082	ACTAGAGGCTG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-082
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL083	ACGCGACGATG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-083
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL084	ATAGTGTGTCG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-084
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL085	ACACACTGTCG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-085
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL086	ACGATGAGTCG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-086
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL087	ATATACGGTCG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-087
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL088	AGCGTACGGCG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-088
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL089	ATACGATGGCG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-089
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL090	AGTATAGGGCG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-090
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL091	ATATCTGGACG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-091
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL092	AGAGAGCGACG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-092
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL093	AGCACTAGACG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-093
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL094	AGTCGCGGACG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-094
B	CTATGCGCCTTGCCAGCCCGC	TCAG	RL095	ACACTGGGACG	TGCTGCCTCCCGTAGGAGT	rev	338r-454B-095
B	CGTATCGCCTCCCTCGCGCCA	TCAG	no mid	no mid, same for all	AGAGTTTGATCCTGGCTCAG	for	27f-454A